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消毒劑細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)方法步驟
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  • 2025-03-19

　　消毒劑細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)，又稱Ames試驗(yàn)，是一種用于檢測消毒劑是否具有致突變性的體外毒理學(xué)測試方法。該試驗(yàn)通過觀察受試物能否引起特定突變菌株的基因回復(fù)突變，從而評估其潛在的遺傳毒性?。


　　細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)利用營養(yǎng)缺陷型菌株（如鼠傷寒沙門氏菌或大腸桿菌）檢測受試物是否引起基因突變。這些菌株在特定基因上發(fā)生突變，無法合成某些必需氨基酸（如組氨酸或色氨酸），因此只能在含有這些氨基酸的培養(yǎng)基上生長。當(dāng)受試物引起回復(fù)突變時(shí)，菌株重新獲得合成能力，可在無氨基酸的培養(yǎng)基上生長并形成可見菌落，從而評估受試物的致突變性?。


細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)


　　消毒劑細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)方法步驟


　　（1）試驗(yàn)步驟


　　?菌株準(zhǔn)備?：將菌株接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)10小時(shí)或靜置培養(yǎng)16小時(shí)，使活菌數(shù)達(dá)到1×10?/mL～2×10?/mL?。


　　?培養(yǎng)基制備?：底層培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿中，靜置凝固。頂層培養(yǎng)基融化后分裝于無菌試管，每管2mL，45℃水浴保溫?。


　　?受試物處理?：在保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入菌液和受試物（需活化時(shí)加入10%S9混合液），混勻后迅速傾倒在底層培養(yǎng)基上，靜置凝固?。


　　?培養(yǎng)與觀察?：將培養(yǎng)皿放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，觀察并計(jì)數(shù)回復(fù)突變菌落數(shù)量。必要時(shí)延長至72小時(shí)?。


　　（2）試驗(yàn)方法


　　?平板摻入法?：將受試物與菌液混合后直接加入頂層培養(yǎng)基，傾倒在底層培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后觀察菌落?。


　　?點(diǎn)試法?：在頂層培養(yǎng)基上放置無菌濾紙片，滴加受試物或?qū)⒐腆w受試物結(jié)晶置于紙片或瓊脂表面，培養(yǎng)后觀察菌落?。


　　?預(yù)培養(yǎng)法?：將受試物與菌液在37℃預(yù)培養(yǎng)20分鐘或30℃預(yù)培養(yǎng)30分鐘，再加入頂層培養(yǎng)基，后續(xù)步驟同平板摻入法?。


　?。?）結(jié)果判定


　　?陽性結(jié)果?：回復(fù)突變菌落數(shù)為陰性對照的兩倍以上，且具有劑量-反應(yīng)關(guān)系，表明受試物具有致突變性?。


　　?陰性結(jié)果?：回復(fù)突變菌落數(shù)與陰性對照無顯著差異，表明受試物無致突變性?。


　　（4）注意事項(xiàng)


　　?試驗(yàn)條件?：試驗(yàn)需在嚴(yán)格控制的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性?。


　　?倫理要求?：涉及動物試驗(yàn)時(shí)，需遵守實(shí)驗(yàn)動物福利原則，減少動物痛苦?。