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　　在海洋生態(tài)系統(tǒng)的研究與監(jiān)測(cè)中，海水鐵細(xì)菌的檢測(cè)是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。鐵細(xì)菌作為一類特殊的微生物，對(duì)海洋環(huán)境有著多方面的影響。海水鐵細(xì)菌檢測(cè)對(duì)于了解海洋生態(tài)環(huán)境、保障海洋工程設(shè)施安全等方面具有重要意義。通過(guò)嚴(yán)格遵循 HY/T 176 - 2014 標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法，能夠準(zhǔn)確獲取海水中鐵細(xì)菌的相關(guān)信息，為海洋環(huán)境的保護(hù)和管理提供有力支持。《海水中鐵細(xì)菌的測(cè)定 MPN 法》HY/T 176 - 2014 標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn)確測(cè)定海水中鐵細(xì)菌提供了科學(xué)規(guī)范的方法。

　　中科檢測(cè)是第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，可提供一系列海水鐵細(xì)菌檢測(cè)服務(wù)，并出具權(quán)威報(bào)告。

　　鐵細(xì)菌檢測(cè)必要性

　　鐵細(xì)菌是一類能將溶于水中的棕色亞鐵離子轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苡谒暮稚蚝谏趸F水合物的細(xì)菌。

　　它們?cè)诤Ｑ蟓h(huán)境中廣泛存在，其活動(dòng)會(huì)對(duì)海水的物理化學(xué)性質(zhì)以及海洋生態(tài)系統(tǒng)產(chǎn)生重要影響。一方面，鐵細(xì)菌的代謝活動(dòng)可能導(dǎo)致管道、設(shè)備等的腐蝕，影響海洋工程設(shè)施的安全和使用壽命。

　　另一方面，鐵細(xì)菌的大量繁殖可能改變海洋中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的循環(huán)和分布，對(duì)海洋生物的生存和繁衍產(chǎn)生間接影響。此外，通過(guò)檢測(cè)海水中鐵細(xì)菌的數(shù)量和分布，還可以為海洋環(huán)境質(zhì)量的評(píng)估提供重要依據(jù)，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)海洋生態(tài)系統(tǒng)的潛在問(wèn)題。

　　鐵細(xì)菌檢測(cè)方法詳解

　　1、方法原理

　　本方法采用多管發(fā)酵技術(shù)，在（29±1）℃的條件下培養(yǎng) 14 天。如果試管中棕色消失且形成褐色或黑色沉淀，表明發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)，然后采用 MPN（most probable number，最可能數(shù)）法對(duì)被測(cè)試樣中的鐵細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。MPN 法是應(yīng)用概率理論來(lái)估算細(xì)菌濃度的方法。

　　2、 試劑與材料

　　試驗(yàn)所需試劑與材料眾多，除特殊規(guī)定外，需使用分析純?cè)噭┖头?GB/T 6682 中三級(jí)水規(guī)格的水。具體包括硫酸鎂、硫酸銨、磷酸氫二鉀、無(wú)水氯化鈣、硝酸鈉、檸檬酸鐵銨、硫代硫酸鈉、陳海水（取自未污染海域，裝入玻璃瓶后儲(chǔ)放在暗處 15 天以上的海水）、按 GB/T 16310.1 - 1996 配制的人工海水、氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液以及牛皮紙等。

　　3、儀器與設(shè)備

　　1）無(wú)菌操作相關(guān)設(shè)備：無(wú)菌箱（室）或超凈工作臺(tái)，用于保證操作環(huán)境的無(wú)菌狀態(tài)。

　　2）滅菌設(shè)備：蒸汽壓力滅菌器，用于對(duì)試管、吸管等器具進(jìn)行滅菌處理。

　　3）培養(yǎng)設(shè)備：生化培養(yǎng)箱（控制溫度為（29±1）℃），為鐵細(xì)菌培養(yǎng)提供適宜溫度。

　　4）其他設(shè)備：還包括電熱干燥箱、電熱恒溫水浴鍋、天平、冰箱、振蕩器、刻度吸管或移液器、量筒、燒杯、無(wú)菌試管、無(wú)菌刻度吸管或移液器和 Tip 頭、無(wú)菌采樣瓶、試管架以及 pH 計(jì)或精密 pH 試紙（測(cè)量范圍 6.4 - 8.0）等。

　　4、分析檢測(cè)

　　1）水樣的采集：使用滅菌采樣瓶采集被測(cè)樣品，采樣過(guò)程中要保護(hù)瓶口和頸部，防止雜菌污染，瓶?jī)?nèi)要留有足夠空間以便測(cè)定前搖勻。若水樣中有余氯或不確定是否有余氯，需在采樣前加入硫代硫酸鈉，每升水樣約加 0.1g；若確定無(wú)余氯，則無(wú)需添加。水樣采集后應(yīng)立即測(cè)定，若 2 小時(shí)內(nèi)不能測(cè)定，需在冰箱中冷藏保存，保存時(shí)間不宜超過(guò) 24 小時(shí)。冷藏后的水樣測(cè)定時(shí)，需先在生化培養(yǎng)箱中活化 4 - 5 小時(shí)。

　　2）水樣的稀釋和接種：按 10 倍稀釋法對(duì)水樣進(jìn)行系列稀釋，使最后一個(gè)稀釋度接種培養(yǎng)后無(wú)鐵細(xì)菌生長(zhǎng)。將不同稀釋度的水樣分別接種到已滅菌裝有培養(yǎng)基的試管中，每個(gè)稀釋度重復(fù)接種 3 - 5 管，每接種 1mL 需更換一支無(wú)菌吸管或 Tip 頭。另取一組已滅菌裝有培養(yǎng)基的試管，接種 1mL 無(wú)菌稀釋水作為空白對(duì)照，且整個(gè)操作需采取無(wú)菌操作方法。

　　3）培養(yǎng)：將接種后的試管在生化培養(yǎng)箱中，于（29±1）℃培養(yǎng) 14 天。

　　5、計(jì)數(shù)與報(bào)告

　　1）若試管中產(chǎn)生褐色或黑色沉淀且原培養(yǎng)基中棕色消失變?yōu)橥该鳡?，表明有鐵細(xì)菌存在，以“+”（陽(yáng)性）表示，否則以“-”（陰性）表示。若空白對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明測(cè)定過(guò)程有污染，本次測(cè)定無(wú)效。

　　2）數(shù)出 10 進(jìn)位稀釋管中陽(yáng)性試管數(shù)，當(dāng)陽(yáng)性組合指數(shù)記錄下來(lái)。若在 10 進(jìn)位稀釋中多于三個(gè)稀釋度時(shí)，只需用其中依次的三個(gè)稀釋度。以每個(gè)稀釋度接種 5 管為例，先選出 5 管全部陽(yáng)性反應(yīng)的最大稀釋度，再選出與其相連的兩個(gè)更高稀釋度，算出陽(yáng)性組合指數(shù)。若有更高稀釋度仍產(chǎn)生一個(gè)陽(yáng)性試管，應(yīng)將其并入所選擇的最高稀釋度的陽(yáng)性結(jié)果中。

　　3）根據(jù)陽(yáng)性組合的指數(shù)，查附錄得出最大可能菌數(shù)，除以陽(yáng)性組合指數(shù)的第一位數(shù)字的稀釋度數(shù)，即為每毫升水樣中鐵細(xì)菌的菌數(shù)。報(bào)告方式按照標(biāo)準(zhǔn)中的表格執(zhí)行。