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　　在廣袤的海洋中，浮游植物猶如一群默默耕耘的“生產(chǎn)者”，它們通過光合作用為整個(gè)海洋生態(tài)系統(tǒng)注入能量。而浮游植物色素作為光合作用的關(guān)鍵參與者，不僅影響著浮游植物的生理活動(dòng)，還與海洋生態(tài)環(huán)境的變化息息相關(guān)。準(zhǔn)確測(cè)定海洋浮游植物色素，對(duì)于深入了解海洋生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能、評(píng)估海洋環(huán)境質(zhì)量以及預(yù)測(cè)海洋生態(tài)變化具有重要意義。《海洋調(diào)查規(guī)范 第6部分：海洋生物調(diào)查》GB/T 12763.6 - 2007標(biāo)準(zhǔn)為海洋浮游植物色素測(cè)定提供了科學(xué)、規(guī)范的方法。

　　中科檢測(cè)是第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，遵循《海洋調(diào)查規(guī)范 第6部分：海洋生物調(diào)查》 GB/T 12763.6-2007標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)查，可提供一系列海洋生物調(diào)查服務(wù)，包括海洋浮游植物色素測(cè)定、微生物，微微型、微型和小型浮游生物等，并出具權(quán)威報(bào)告。

　　海洋浮游植物色素測(cè)定的必要性

　　從海洋生態(tài)系統(tǒng)的角度來看，浮游植物色素是浮游植物進(jìn)行光合作用的核心物質(zhì)。不同種類的浮游植物含有不同類型和比例的色素，如葉綠素a、b、c以及類胡蘿卜素等。這些色素能夠吸收特定波長(zhǎng)的光，將光能轉(zhuǎn)化為化學(xué)能，為浮游植物的生長(zhǎng)、繁殖提供能量。通過測(cè)定浮游植物色素，可以了解浮游植物的種類組成和分布情況，進(jìn)而推斷海洋生態(tài)系統(tǒng)的健康狀況。例如，當(dāng)某些特定色素的含量發(fā)生顯著變化時(shí)，可能意味著海洋環(huán)境受到了污染、溫度變化或營(yíng)養(yǎng)鹽失衡等影響，導(dǎo)致浮游植物群落結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。

　　在海洋環(huán)境監(jiān)測(cè)方面，浮游植物色素測(cè)定是評(píng)估海洋初級(jí)生產(chǎn)力的重要手段。初級(jí)生產(chǎn)力是指浮游植物在一定時(shí)間和空間內(nèi)通過光合作用所固定的太陽(yáng)能總量，它是海洋生態(tài)系統(tǒng)能量流動(dòng)的基礎(chǔ)。而浮游植物色素的含量與初級(jí)生產(chǎn)力密切相關(guān)，準(zhǔn)確測(cè)定色素含量可以估算出海洋的初級(jí)生產(chǎn)力，為評(píng)估海洋生態(tài)系統(tǒng)的能量供應(yīng)和物質(zhì)循環(huán)提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)。這對(duì)于了解海洋生態(tài)系統(tǒng)的承載能力、預(yù)測(cè)漁業(yè)資源的變化以及評(píng)估海洋對(duì)全球氣候變化的響應(yīng)具有重要意義。

　　此外，海洋浮游植物色素測(cè)定還在海洋科學(xué)研究的其他領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。例如，在研究海洋生物地球化學(xué)循環(huán)時(shí)，色素可以作為示蹤劑，幫助科學(xué)家了解營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來源、遷移和轉(zhuǎn)化過程；在探索海洋生態(tài)系統(tǒng)的演變歷史時(shí)，通過分析沉積物中的色素組成和含量，可以重建過去的海洋環(huán)境和生態(tài)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)。

　　海洋浮游植物色素測(cè)定方法

　　1、萃取熒光法（葉綠素a）

　　1）方法原理：葉綠素a的丙酮萃取液在藍(lán)光激發(fā)下會(huì)產(chǎn)生紅色熒光。通過過濾一定體積的海水獲取浮游植物，用90%丙酮提取其色素，再利用熒光計(jì)測(cè)定提取液酸化前后的熒光值，從而計(jì)算出海水中葉綠素a的濃度。

　　2）主要儀器設(shè)備：包括激發(fā)光波長(zhǎng)450nm、發(fā)射光波長(zhǎng)685nm的熒光計(jì)，抽濾裝置（含濾器、支架、抽濾瓶和真空泵），截留效率相當(dāng)于0.65μm孔徑聚碳酸酯微孔濾膜的玻璃纖維濾膜，以及冰箱。

　　3）試劑：體積分?jǐn)?shù)為90%的丙酮、體積分?jǐn)?shù)為10%的鹽酸、濃度為10g/dm?的碳酸鎂溶液。

　　4）測(cè)定步驟：先對(duì)熒光計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)，包括校準(zhǔn)頻率、標(biāo)準(zhǔn)葉綠素a溶液制備、濃度標(biāo)定、標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制以及換算系數(shù)測(cè)定等步驟。水樣測(cè)定時(shí)，按規(guī)定深度采水樣并記錄，根據(jù)調(diào)查海區(qū)盡快過濾海水，濾膜在規(guī)定時(shí)間內(nèi)提取或低溫保存，然后進(jìn)行色素提取和熒光測(cè)定，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

　　2、分光光度法（包括葉綠素a、b和c）

　　1）方法原理：葉綠素a、b、c的丙酮萃取液在紅光波段各有吸收峰。通過過濾一定體積海水中的浮游植物，用90%丙酮提取其葉綠素，再用分光光度計(jì)測(cè)定，依據(jù)三色分光光度法方程計(jì)算出三種葉綠素的濃度。

　　2）主要儀器設(shè)備：波長(zhǎng)準(zhǔn)確、波帶寬度≤2nm、消光值可讀至0.001的分光光度計(jì)，抽濾裝置，截留效率相當(dāng)?shù)臑V膜，以及貯樣干燥器、研磨器、離心機(jī)、具塞離心管和冰箱等。

　　3）試劑：濃度為10mg/dm?的碳酸鎂溶液和體積分?jǐn)?shù)為90%的丙酮。

　　4）測(cè)定步驟：采樣和過濾與萃取熒光法類似，但過濾海水體積根據(jù)調(diào)查水域而定。過濾后的樣品研磨提取，若條件不允許則低溫保存。然后進(jìn)行研磨、提取、離心，最后將提取液注入比色槽，以90%丙酮作空白對(duì)照，測(cè)定不同波長(zhǎng)處的溶液消光值并記錄。

　　3、高效液相色譜（HPLC）法

　　1）方法原理：浮游植物所含的各種光合色素經(jīng)提取后，在特定溶劑系統(tǒng)中通過高效液相色譜柱進(jìn)行分離，由檢測(cè)器檢測(cè)并獲得色譜圖。通過與標(biāo)準(zhǔn)色素比較保留時(shí)間和色譜圖鑒別色素種類，根據(jù)色譜峰面積計(jì)算含量。

　　2）主要儀器設(shè)備：包括溶劑流動(dòng)相系統(tǒng)、高壓泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、計(jì)算機(jī)等的高效液相色譜儀，以及抽濾裝置、玻璃纖維濾膜、液氮罐、超聲波粉碎器和離心機(jī)等。

　　3）試劑：丙酮、水、甲醇、乙腈和乙酸乙酯（均為色譜純），醋酸銨，BHT（2,6-二叔丁基對(duì)甲酚），角黃素。

　　4）測(cè)定步驟：采樣和過濾根據(jù)海水中浮游植物數(shù)量而定，注意抽濾負(fù)壓和避光。濾膜萃取時(shí)加入丙酮和角黃素，超聲粉碎并低溫提取，分析前過濾。HPLC系統(tǒng)準(zhǔn)備包括選擇合適的進(jìn)樣閥、保護(hù)柱、分析柱、檢測(cè)器等，并配制好溶劑。操作步驟包括平衡系統(tǒng)、準(zhǔn)備工作標(biāo)準(zhǔn)液、進(jìn)樣、分離、鑒定和填寫表格等。

　　GB/T 12763.6 - 2007標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定以上三種方法中以萃取熒光法優(yōu)先。