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細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)方法及常用菌株

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2025-02-08

　　?細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）?是一種用于檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)是否具有致突變性的重要方法。該試驗(yàn)由美國科學(xué)家布魯斯·艾姆斯（BruceAmes）在1970年代開發(fā)，并廣泛應(yīng)用于評(píng)估新化學(xué)物質(zhì)（如藥物、食品添加劑、農(nóng)藥、化妝品成分等）的致突變潛力?。

　　Ames試驗(yàn)具有快速、簡便、敏感、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，適用于大規(guī)模篩選化合物的致突變性。它能夠檢測(cè)多種類型的基因突變，包括堿基對(duì)替換和移碼突變?。該試驗(yàn)在多個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，包括食品安全性評(píng)估、環(huán)境監(jiān)測(cè)、藥物和化學(xué)品毒性評(píng)估、農(nóng)藥安全性評(píng)估以及抗突變物篩選等?。

　　細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)方法

　　Ames試驗(yàn)利用特定類型的突變菌株，這些菌株攜帶有特定的基因突變，導(dǎo)致它們不能在沒有外源性營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中生長。這些突變菌株通常是營養(yǎng)缺陷型，無法自行合成某些必需氨基酸或維生素。

　　當(dāng)將這些菌株暴露于測(cè)試化合物中時(shí)，如果化合物具有致突變性，它會(huì)誘導(dǎo)這些菌株產(chǎn)生基因回復(fù)突變，使其重新獲得在無外源性營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上生長的能力。通過檢測(cè)這些回復(fù)突變菌株的生長情況，可以評(píng)估化合物的致突變性?。

　　1、試驗(yàn)步驟

　　?預(yù)實(shí)驗(yàn)?：對(duì)未知或懷疑對(duì)試驗(yàn)菌株有抑制作用的試驗(yàn)樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，評(píng)估樣品是否有細(xì)胞毒性。如有抑制作用，則需對(duì)試驗(yàn)樣品進(jìn)行梯度稀釋，直至找到無細(xì)胞毒性的濃度范圍?。

　　2、?主試驗(yàn)?：

　　將冷凍保存的菌株培養(yǎng)物接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)增長期。

　　融化頂層培養(yǎng)基，并將其分裝于無菌小試管中。

　　在保溫的頂層培養(yǎng)基中加入試驗(yàn)菌株的新鮮菌液、試驗(yàn)樣品浸提液（或陰性、陽性對(duì)照液）以及代謝活化劑（如S9混合物），混勻后迅速傾倒在底層培養(yǎng)基上，靜置凝固。

　　將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)48-72小時(shí)。

　　觀察和計(jì)數(shù)回復(fù)突變菌落的數(shù)量?。