400-133-6008
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2025-02-06
微生物學檢查方法包括微生物限度檢查法和無菌檢查法。微生物限度檢查法是檢查非規(guī)定滅菌制劑及原輔料受微牛物污染程度，包括細菌、霉菌等菌種的數目及控制菌檢查。如外用制劑須檢查和驗證銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌；若制劑含藥材原粉等，述需檢查和驗證大腸菌群和（或）沙門菌。通過不同給藥途徑，因此臨床給藥途徑在微生物限度檢查和方法驗證中有著舉足輕重的地位。
一、細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證
驗證菌種
(1)大腸埃希菌(大腸桿菌)[CMCC(B)44102]；
(2)金黃色葡萄球菌(金黃色葡萄球菌)[CMCC(B)26003]；
(3)枯草芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌)[CMCC(B)63501]；
(4)白色念珠菌(白色念珠菌)[CMCC(F)98001]；
(5)黑曲霉(黑曲霉)[CMCC(F)98003]；
該5種菌株具有普遍的代表性，5種菌分別代表不同的微生物類別，（1）（2）（3）屬細菌，(4)真菌，(5)霉菌。驗證所用的標準菌種的傳代數不得過5代。
驗證方法
1平皿法
對無明顯抑菌作用的水溶性制劑，采用該方法進行微生物限度檢查法的驗證。方法驗證的主要思路：加菌回收。
2培養(yǎng)基稀釋法
略帶抑菌作用的水溶性制劑(上述常規(guī)平皿法試驗菌回收率低于70%的)，可采用該方法進行方法驗證。
3薄膜過濾法
一般適用于對可溶性抑菌制劑。主要思路：濾除抑菌成分，加菌回收。
4離心沉定集菌法
主要思路：離心沉定，離心集菌。
5中和法
主要思路：制備供試液過程中加入適宜的鈍化劑、酶等中和劑，以消除或減小制劑中的抑菌性。
二、控制菌的驗證
驗證菌種
(1)大腸埃希菌(大腸桿菌)[CMCC(B)44102]；
(2)金黃色葡萄球菌(金黃色葡萄球菌)[CMCC(B)26003]；
(3)乙型副傷寒沙門菌(甲型副傷寒沙門氏菌)[CMCC(B)50094]；
(4)銅綠假單胞菌(銅綠假單胞菌)[CMCC(B)10104]；
(5)生孢梭菌(生孢梭菌)[CMCC(B)64941]；
驗證時，依照各品種項下微生物限度標準中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應驗證的菌株。驗證大腸菌群檢查法時，應采用大腸埃希菌作為驗證菌。
驗證方法
?。?）試驗組：取規(guī)定量供試液（各控制菌檢查方法下均有規(guī)定）及10~100cfu試驗菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應的控制菌檢查法進行檢查。當采用薄膜過濾法時，試驗菌液應加在最后一次沖洗液中，沖洗后，取出濾膜接種到增菌培養(yǎng)基中。
?。?)陰性菌對照組：設立陰性菌對照組是為了驗證該控制菌的檢查方法的專屬性。方法同試驗組，驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照用金黃色葡萄球菌；驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌檢查法時得陰性對照菌采用大腸埃希菌。
結果判斷：陰性菌對照組不得檢出。若試驗組檢出試驗菌，證明可按此供試液制備方法和控制菌檢查法進行控制菌檢查。若試驗組未檢出試驗菌，應消除供試品種的抑菌活性，方法同細菌、霉菌和酵母菌檢查方法驗證(稀釋法、薄膜過濾法、中和劑、沉定法)，建立新的方法，重新驗證。
檢驗檢測認證服務機構。
整體技術解決方案。
